Synthèse de protéines

Bonjour,

Le procédé consiste à synthétiser des protéines à partir des extraits cellulaire (dans ton cas E. Coli) obtenus par lyse de la cellule et centrifugation. Cela permet d’obtenir l’ADN contenant le gène, les ribosomes (qui synthétiserons l’ADN), ainsi que divers éléments nécessaires à la synthèse des protéines.

Ces extraits sont placés "in vitro", environnement qui reproduit l’intérieur cellulaire.

Jusque là, rien de nouveau, c’est juste une cellule qu’on a déplacé "in vitro". On a la base et on ne va pas se limiter à ça, ça ne sert à rien.

Nous on cherche le rendement, du coup on va y intégrer une source d’acide aminés (beaucoup), de l’énergie nécessaire à la réaction et on va amplifier le génome par réplication synthétique de l’ADN, cette réplication étant effectuée par réaction en chaîne par polymérase (technique permettant de répliquer un milliard de fois l’ADN en 1 heure ) ou divers autres techniques inventés à l’heure actuelle.

La différence c’est donc plus de contrôle, notamment du rendement et même de la qualité du gène, des modifications du gène, etc. C’est du génie génétique, de la chimie de synthèse, des techniques industriels et de la recherche scientifique…

La lyse c’est le fait de détruire la membrane de la cellule afin de la "tuer" (notamment par le phénomène de pression osmotique qui en résulte). Le substrat obtenu après lyse est le lysats.

La source d’énergie, ce sont les classiques composés phosphoré tels que l’ATP (adénosine triphosphate). Au laboratoire, nous utiliserons par exemple le phosphoénolpyruvate, le phosphate d’acétyle et du phosphate de créatine.

Les acides aminés sont les composants des protéines. Le ribosome scan les codons d’ADN et synthétise les protéines en collaborant avec l’ARNt qui lui envoi l’acide aminé correspondant au codon scané. La protéine est donc assemblée brique par brique, les briques étant les acides aminés. De ce fait, en ajoutant beaucoup d’acides aminés on aura beaucoup de protéines d’autant plus que nous avons énormément répliqué l’ADN il y aura donc beaucoup de besoins en acide aminés.

L’amorce n’est que l’indicateur (courte séquence sur le brin d’ADN matrice) qui permet à l’ADN polymérase de procéder à la synthèse du brin complémentaire. Ce processus se déroule lors de la réplication de l’ADN.