Gène rapporteur et PCR

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Bonjour,

Je ferai bientôt en labo une PCR et sur papier je comprends assez bien le but et comment ça fonctionne mais on parle dans le protocole de gène rapporteur et de GFP (Green Fluorescent Protein). Je ne comprends pas exactement à quoi ils servent et comment ça marche (quand on l’ajoute?). D’après ce que j’ai compris, le but est de pouvoir caractériser notre ADN amplifié avec ce gène rapporteur.

De plus, j’ai vu qu’il existait aussi la Luciférase qui était utilisée (sur Wiki). Savez-vous ce qu’on utilise d’autre comme gène rapporteur qui est sympa et utile ?

Merci! :)

Salut! Un gène rapporteur, c’est tout simplement un gène qui permet de vérifier si ton expérience a bien marché. Et la Green Fluorescent Protein, en français Protéine Fluorescente Verte, c’est juste une protéine vert fluo tirée d’une méduse vert fluo et qui est facile à voir au microscope.

Souvent, dans les labos de médecine, on veut savoir s’il y a une substance ou une molécule à un endroit du corps. Admettons tu veux savoir si on trouve de l’adrénaline dans une glande. Pour pouvoir bien voir l’adrénaline au microscope, ce serait pratique qu’elle soit vert fluo, non? Eh bien, ce qu’on fait, c’est qu’on modifie le gène qui cause normalement la production de l’adrénaline chez la souris. On fait juste rajouter la séquence de l’ADN de méduse qui produit la protéine fluo, et on la fusionne à la séquence qui produit l’adrénaline et… magie! On produit de l’adrénaline fluo (c’est un peu plus compliqué que ça mais c’est le principe général). Bref, on crée des souris mutantes qui possèdent un gène codant pour cette protéine fluo. Ensuite, si on regarde cette glande au microscope, on pourra voir les endroits précis dans le tissu où se situe l’adrénaline. Le gène rapporteur est donc le gène qui code pour la protéine fluo (mais il existe d’autres gènes rapporteurs). Si on ne voyait aucune fluorescence au microscope, ça voudrait dire que l’expérience s’est mal déroulée vu que l’ADN ne s’est pas transformé en protéines. On peut faire ça avec à peu près n’importe quel tissu ou protéine.

Concernant le PCR (polymérisation en chaîne par polymérase), c’est simplement une manière de copier un gène des milliards de fois pour qu’il soit plus facile à utiliser par la suite.

Mais théoriquement, si tu as un laboratoire sur ces sujets, tu devrais déjà avoir suivi des cours ou de la documentation qui en parle, alors je t’invite à lire tes notes et tes manuels pour davantage d’information.

J’espère que ça t’a un peu éclairci. :)

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Merci beaucoup pour ces clarifications. Est-ce que le choix de ce gène rapporteur a une importance ? Par exemple, le choix du GFP par rapport à la Luciférase?

Faut-il vraiment un microscope pour pouvoir visualiser ce fluo ou bien mettre aux UV la solution suffit ? Par hasard, tu connais quoi comme autre rapporteur qui peut être utile et pourquoi (mis à part YFP, etc) ? :D

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Concernant le choix du gène rapporteur, ça dépend de ce que tu veux observer.

Le microscope c’est évidemment juste pour voir plus proche, mais les microscopes à fluorescence ont déjà un système qui permet de voir la fluorescence intégrée dans le système. Concernant ta deuxième question, je ne répondrai pas car j’ai l’impression que tu veux qu’on fasse ton travail à ta place. Mais tu pourras trouver très facilement la réponse en cherchant un peu, en fait la page « gène rapporteur » de Wikipédia est très claire à ce sujet

Bonne chance. :)

Concernant ta deuxième question, je ne répondrai pas car j’ai l’impression que tu veux qu’on fasse ton travail à ta place.

Le Gigot

Non, je trouve justement la page Wikipedia très peu claire et ce que je vais faire en labo est avec du GFP. C’était simplement pour en savoir plus. Wikipedia donne simplement la GFP et la Luciférase.. Il doit y en a avoir une tonne d’autres qui sont super intéressantes, non? Ils donnent aussi des exemples avec l’activité enzymatique (gène GUS, …) mais je suppose que ça doit être bien plus chaud à détecter (méthodes cinétiques?)

Tu viens de donner toi-même la réponse. Le gène GUS est également un gène rapporteur. Ce n’est pas plus « chaud » à détecter : au contraire, il colore directement les cellules en bleu lorsqu’il est activé, donc il est très facile à détecter. :)

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